Centrifuga a bassa velocità

A centrifuga a bassa velocitàgira per creare una forza centrifuga che separa componenti di diverse densità in un campione. Durante la separazione cellulare, le cellule, i frammenti cellulari e altre biomolecole sono separati in diverse posizioni dalla forza centrifuga, a seconda della loro massa e densità. In particolare, quando il tubo del campione viene ruotato ad alta velocità all'interno del rotore di centrifuga, la forza centrifuga sui diversi componenti della miscela è proporzionale alla loro massa ed è anche influenzata dalla velocità e dal raggio di rotazione. Le cellule o le particelle più grandi vengono gettate verso il fondo del tubo di centrifuga, mentre i componenti più piccoli rimangono nello strato superiore. Questo principio di separazione basato su densità e massa rende centrifughi a bassa velocità uno strumento ideale per la separazione cellulare.

● Scegliere la giusta velocità e il tempo centrifugo: La scelta della velocità e del tempo è cruciale per l'efficacia della separazione cellulare. Una velocità di rotazione troppo alta può portare a rottura o danno cellulare, mentre un tempo troppo lungo può portare all'aggregazione cellulare o alle precipitazioni incomplete. Pertanto, la selezione dei parametri centrifughi dovrebbe essere considerata in base al tipo, alla dimensione e alla densità delle cellule.
● Garantire il saldo del campione: L'equilibrio del campione è la chiave per impedire alla centrifuga di generare vibrazioni e rumore durante il funzionamento. Quando si inseriscono campioni, è necessario garantire che i campioni in tutti i tubi di centrifuga siano di massa uguale o simile. Se c'è una grande differenza nella qualità del campione, è possibile aggiungere una quantità adeguata di tampone o soluzione salina normale alla tuba di centrifuga più leggera per raggiungere l'equilibrio.
● Selezionare la provetta di centrifuga giusta: La qualità e la tenuta della tuba di centrifuga hanno anche un impatto importante sull'efficacia della separazione cellulare. I tubi centrifughi di alta qualità hanno una buona resistenza alla tenuta e alla corrosione, che può effettivamente impedire la perdita e la contaminazione del campione. Allo stesso tempo, le specifiche del tubo centrifugo devono anche essere selezionate in base al volume del campione e alla forza centrifuga richiesta.
● Presta attenzione alla manutenzione e alla manutenzione della centrifuga: Pulisci regolarmente la camera centrifuga e il rotore della centrifuga per evitare la contaminazione residua del campione. Pulisci il tempo dopo l'uso per evitare la corrosione causata da residui liquidi. Allo stesso tempo, è anche necessario controllare regolarmente il cavo di alimentazione e le spine e altri componenti della centrifuga per garantire che siano intatti ed evitare rischi per la sicurezza.

● Trattamento cellulare nell'ingegneria genetica: Nell'ingegneria genetica, le cellule devono spesso essere coltivate, trasfettate, schermate e altri trattamenti. Le centrifughe a bassa velocità possono essere utilizzate per passaggi come la concentrazione e il lavaggio delle sospensioni cellulari, nonché per la raccolta di cellule dopo la trasfezione. Per centrifugazione, le impurità e le cellule non trasfettate nel terreno di coltura cellulare possono essere rimosse e l'efficienza e la purezza della trasfezione genica possono essere migliorate.
● Purificazione e isolamento delle proteine: Nella ricerca sulle proteine, le proteine ​​specifiche devono essere purificate da campioni biologici complessi. Le centrifughe a bassa velocità possono essere utilizzate per il chiarimento iniziale delle soluzioni proteiche e la rimozione di impurità, come detriti cellulari, acidi nucleici, ecc. In base al trattamento centrifugo, è possibile ottenere una soluzione proteica relativamente pura, che fornisce la base per le successive fasi di purificazione.
● Isolamento e purificazione delle particelle di virus: Le particelle di virus di solito hanno una densità e una dimensione specifiche e possono essere separate e purificate da centrifughe a bassa velocità. Ad esempio, nella ricerca virologica, le particelle virali possono essere separate dalle colture cellulari usando la centrifugazione differenziale. Questo metodo sfrutta le differenze nelle forze centrifughe a velocità diverse per separare le particelle virali da altri componenti cellulari.
● Produzione e controllo di qualità dei farmaci biologici: Nel processo di produzione dei farmaci biologici, le centrifughe a bassa velocità vengono spesso utilizzate per il chiarimento del liquido di coltura cellulare, la rimozione dei detriti cellulari e la separazione iniziale dei prodotti farmaceutici. Inoltre, nel controllo di qualità dei farmaci, le centrifughe a bassa velocità possono anche essere utilizzate per rilevare indicatori chiave come la distribuzione delle dimensioni e la stabilità delle particelle di farmaco.

◇ Separazione primaria: Centrifughi a bassa velocità sono spesso utilizzati per la separazione primaria delle particelle di virus. Nel processo di estrazione del virus, particelle di grandi dimensioni come frammenti cellulari e impurità possono essere rimosse mediante centrifugazione a bassa velocità e è possibile ottenere una sospensione del virus relativamente pura. Questo passaggio facilita le successive fasi di purificazione.
◇ Arricchimento del virus: In alcuni casi, le centrifughe a bassa velocità possono anche essere utilizzate per l'arricchimento del virus. Regolando il tempo e la velocità della centrifuga, le particelle di virus possono essere depositate nella parte inferiore della tuba di centrifuga, in modo che il campione di virus concentrato possa essere ottenuto estraendo il surnatante. Tuttavia, va notato che l'effetto di arricchimento dei centrifughe a bassa velocità è relativamente limitato e per occasioni in cui sono richiesti virus ad alta purezza, sono generalmente richiesti altri metodi di purificazione.

 

● Metodo centrifugo differenziale: Il metodo centrifugo differenziale è un metodo per separare particelle di dimensioni e densità diverse usando velocità diverse e tempi centrifughi. La centrifugazione differenziale viene spesso utilizzata per rimuovere ulteriormente le impurità e concentrare il virus durante la purificazione del virus. Dopo aver rimosso grandi particelle come gli organelli mediante centrifugazione a bassa velocità, le particelle di virus sono precipitate da centrifugazione ad alta velocità.
● Metodo di centrifugazione del gradiente di densità: Metodo di centrifugazione del gradiente di densità è l'uso di media di densità diverse per formare un gradiente, in modo che particelle di densità diverse si accontentino di posizioni diverse nel metodo del gradiente. Nella purificazione del virus, la centrifugazione del gradiente di densità viene spesso utilizzata per separare le particelle di virus da altre impurità di densità simile (come proteine, acidi nucleici, ecc.). Preparando in anticipo il gradiente di densità nella provetta di centrifuga e quindi aggiungendo la sospensione del virus sulla superficie del gradiente per la centrifugazione, le particelle di virus si stabiliranno in una posizione specifica nel gradiente per formare una zona di sedimentazione.
● Metodo di precipitazione: Il metodo di precipitazione è di precipitare le particelle di virus aggiungendo reagenti chimici. Gli agenti precipitanti comuni includono solfato di ammonio, polietilen glicole (PEG), ecc. Il metodo di precipitazione può essere utilizzato per un'ulteriore purificazione del virus. Regolando la concentrazione e il valore del pH del precipitatore, le particelle di virus possono essere selettivamente precipitate per rimuovere le impurità.
● Metodo di filtrazione: Il metodo di filtrazione è un metodo per separare le particelle di virus da altre impurità mediante colonna di cromatografia di filtrazione in gel. La colonna cromatografica del filtro in gel è separata in base alla dimensione delle particelle e le grandi molecole fluiscono prima dalla colonna cromatografica e le piccole molecole fluiscono in seguito. Selezionando condizioni di gel e cromatografiche adatte, le particelle di virus possono essere effettivamente separate da altre impurità.
● Metodo elettroforetico: Metodo elettroforetico è l'uso dell'azione del campo elettrico per realizzare particelle cariche nel metodo di migrazione del campo elettrico. Nella purificazione del virus, l'elettroforesi viene spesso utilizzata per separare le particelle virali da altre impurità cariche. L'efficace separazione e purificazione delle particelle di virus può essere ottenuta selezionando condizioni e media adatti di elettroforesi.

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