Applicazione dell'analisi HPLC nell'evaporatore rotante

La cromatografia liquida ad alte prestazioni (HPLC) è anche chiamata cromatografia liquida ad alta pressione, cromatografia liquida ad alta velocità, cromatografia liquida ad alta risoluzione e cromatografia su colonna moderna. Si tratta di una tecnologia di separazione analitica efficiente e rapida sviluppata rapidamente negli anni '70 e rappresenta un mezzo importante per i moderni test di separazione.

La cromatografia liquida ad alte prestazioni (HPLC) utilizza il liquido come fase mobile e adotta un sistema di infusione ad alta pressione per pompare la fase mobile come un singolo solvente con polarità diverse o una soluzione mista di solvente e tampone con proporzioni diverse nella colonna cromatografica con fase stazionaria. Dopo che i componenti della colonna sono stati separati, entrano nel rilevatore per il rilevamento, in modo da realizzare l'analisi del campione.

Il meccanismo di separazione della cromatografia liquida ad alte prestazioni è lo stesso di quello della cromatografia su colonna convenzionale, ma l'impaccamento è più fine e deve essere spinto da una pompa ad alta pressione, che ha un'elevata efficienza della colonna e un'elevata velocità di analisi. A differenza della gascromatografia, anche la fase mobile nella cromatografia liquida partecipa al processo di separazione dei componenti e la sua composizione, proporzione e valore di pH possono essere regolati in modo flessibile, con varie modalità di separazione. In pratica, il valore di ritenzione e la selettività dei campioni nella colonna cromatografica vengono regolati modificando la composizione della fase mobile, in modo che i diversi campioni possano essere separati.

 

Componenti dell'analisi HPLC

 

Colonna: La colonna è il componente principale del sistema HPLC, utilizzato per separare i composti nel campione. Le colonne di separazione comuni includono colonna a fase inversa, colonna a scambio ionico, colonna di filtrazione su gel, ecc. E la loro selezione dipende dalle proprietà del composto da separare e dallo scopo dell'analisi.

Fase mobile: La fase mobile è una combinazione di solventi utilizzati nell'HPLC per far passare un campione attraverso una colonna di separazione. La fase mobile è solitamente costituita da una miscela di solventi, che può essere un singolo solvente o una miscela di più solventi in una determinata proporzione. La scelta del flusso appropriato è molto importante per l'effetto di separazione.

Pompa: La pompa viene utilizzata per fornire la fase mobile e spingerla attraverso la colonna di separazione ad una determinata pressione. Le pompe comuni includono la pompa a pressione costante e la pompa a gradiente. La pompa a gradiente può realizzare cambiamenti lineari o non lineari della composizione della fase mobile, in modo da ottenere un migliore effetto di separazione.

Iniettore: L'iniettore viene utilizzato per introdurre il campione da analizzare nel sistema HPLC. Il campionatore può essere una siringa azionata manualmente o un campionatore automatico. Di solito hanno le caratteristiche di volume accurato e buona ripetibilità per garantire un'iniezione accurata del campione.

Forno a colonna: Il forno della colonna viene utilizzato per controllare la temperatura della colonna di separazione. Controllando la temperatura, è possibile modificare il coefficiente di distribuzione e la velocità di separazione del campione nella colonna, ottimizzando così l'effetto di separazione.

Rivelatore: Il rilevatore viene utilizzato per rilevare il composto separato e generare un segnale elettrico correlato alla sua concentrazione. I rilevatori comuni includono il rilevatore di assorbimento ultravioletto-visibile, il rilevatore di fluorescenza e il rilevatore elettrochimico. La scelta del rivelatore dipende dalle caratteristiche del composto da analizzare e dai requisiti di sensibilità di rivelazione.

Sistema di acquisizione dati: Il sistema di acquisizione dati viene utilizzato per ricevere, registrare e analizzare i segnali emessi dal rilevatore. Può convertire il segnale rilevato in parametri quali l'area del picco e il tempo di ritenzione e fornire analisi e interpretazione dei risultati.

 

Dopo che il solvente è stato rimossoevaporatore rotante, il campione ottenuto è solitamente concentrato o solido. Se si desidera analizzare o rilevare ulteriormente i composti nel campione, è possibile analizzarli mediante cromatografia liquida ad alta prestazione (HPLC).

Passaggi generali per l'analisi dei campioni dopo l'evaporazione rotativa mediante HPLC

 

1. Dissoluzione del campione: sciogliere il campione dopo evaporazione rotante in un solvente appropriato. Quando si selezionano i solventi è necessario tenere conto della solubilità della sostanza da analizzare e dei requisiti delle condizioni di analisi HPLC.

2. Preparazione della soluzione standard: Se è necessaria un'analisi quantitativa, è possibile preparare la soluzione standard del composto da testare per la successiva correzione e calcolo dei risultati dell'analisi.

3. Eseguire l'analisi HPLC: iniettare il campione nel sistema HPLC e impostare la colonna di separazione, la fase mobile e il rilevatore appropriati. In base allo scopo dell'analisi, selezionare metodi e parametri appropriati, come portata, temperatura e programma di gradiente.

4. Raccolta e analisi dei dati: il cromatogramma del campione viene raccolto dal sistema HPLC e il composto target viene quantificato o identificato in base all'area del picco, al tempo di ritenzione o ad altri parametri correlati. Per l'analisi quantitativa è possibile utilizzare il metodo della curva standard e il metodo dello standard interno.

5. Interpretazione dei risultati: in base ai risultati dell'analisi, i composti nel campione sono stati valutati qualitativamente e quantitativamente. A seconda delle necessità è possibile generare report o registrare i risultati delle analisi.

 

L'applicazione del rotovap nell'analisi HPLC ha due significati pratici

 

• Concentrazione del campione: in alcuni casi, la concentrazione del campione da analizzare potrebbe essere troppo bassa, pertanto è possibile utilizzare l'evaporatore rotante chimico per concentrare il campione per aumentare la sensibilità di rilevamento dell'analita nell'HPLC.
• Rimozione del solvente: in alcuni campioni, i solventi possono interferire con l'analisi HPLC, quindi è necessario rimuovere o sostituire i solventi nei campioni con solventi adatti per HPLC. L'evaporatore rotante da laboratorio può aiutare a rimuovere il solvente e trasformare il campione in una forma adatta per l'analisi HPLC.

 

Analisi HPLC eevaporatore rotantesono due tecniche comunemente utilizzate nell'analisi chimica e presentano alcune differenze e connessioni nel principio e nell'applicazione.

 

Differenza

 

Principio: L'HPLC si basa sul principio della cromatografia liquida e la separazione e l'analisi quantitativa sono realizzate dall'interazione tra la fase stazionaria (colonna) e la fase mobile (solvente). L'evaporatore utilizza il principio del riscaldamento e della rotazione per far evaporare rapidamente il campione liquido e rimuovere il solvente, in modo da concentrare il campione o modificare l'ambiente solvente del campione.

Campo di applicazione: L'HPLC è ampiamente utilizzato in chimica, farmacia, ambiente e altri campi e può essere utilizzato per la separazione, l'identificazione e l'analisi quantitativa di composti in miscele complesse; L'evaporazione rotativa viene utilizzata principalmente nel processo di concentrazione del campione, rimozione del solvente e preparazione del campione ed è comunemente utilizzata nella sintesi organica, nell'estrazione di prodotti naturali, nella preparazione del campione e in altri campi.

Velocità di analisi: L'analisi HPLC richiede solitamente molto tempo per separare e rilevare i campioni, il che può richiedere da alcuni minuti a diverse ore; L'evaporatore rotante sotto vuoto può far evaporare rapidamente i campioni liquidi in breve tempo, solitamente impiegando solo pochi minuti.

 

Collegare

 

Trattamento del campione: L'apparecchiatura con evaporatore rotante viene spesso utilizzata per concentrare i campioni o rimuovere solventi durante la preparazione dei campioni per rendere i campioni adatti a ulteriori metodi di analisi, come l'HPLC. L'effetto e l'accuratezza dell'analisi HPLC possono essere migliorati concentrando il campione e rimuovendo il solvente mediante evaporatore rotante.

Selezione del solvente: Nell'analisi HPLC, la scelta del solvente è molto importante per l'effetto di separazione; ILevaporatore rotantepuò aiutare a rimuovere il solvente dal campione e trasformare il campione in una forma adatta per l'analisi HPLC. Pertanto, l'evaporatore rotante può fornire condizioni di solvente soddisfacenti per l'analisi HPLC.

 

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